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使用凝膠色譜柱進(jìn)行分離的過(guò)程是什么樣的

更新時(shí)間:2023-09-08瀏覽:1223次

  凝膠色譜柱也被稱(chēng)為分子篩柱或凝膠過(guò)濾柱,是一種常用的色譜柱,用于根據(jù)分子大小分離和純化樣品中的生物大分子。它基于溶液中大分子與凝膠顆粒之間相互作用的差異來(lái)實(shí)現(xiàn)分離。TSK GEL HHR系列裝填有粒徑為5μm的苯乙烯二乙烯基苯共聚物填料,該類(lèi)色譜柱又優(yōu)良的溶劑可置換性和耐用性。TSK GEL G2000HHR高使用溫度可到60℃。


  使用凝膠色譜柱進(jìn)行分離的過(guò)程如下:

  樣品加載:將待測(cè)樣品以溶液形式加載到色譜柱上,樣品中的生物大分子會(huì)進(jìn)入凝膠顆粒的孔隙中。

  分離過(guò)程:在柱中,較大的生物大分子由于體積較大而無(wú)法進(jìn)入凝膠顆粒的內(nèi)部,從而通過(guò)柱床快速流出;而較小的生物大分子會(huì)進(jìn)入凝膠顆粒的孔隙中,因此在柱中停留的時(shí)間較長(zhǎng)。

  提取純化:根據(jù)分子的大小,通過(guò)逐步洗脫柱床,收集到不同分子大小的組分。較大的分子會(huì)首先洗脫,而較小的分子則在較后的洗脫過(guò)程中被收集。

  凝膠色譜柱的優(yōu)點(diǎn)包括:

  分子選擇性:通過(guò)調(diào)整凝膠顆粒的孔隙大小和性質(zhì),可以選擇性地分離目標(biāo)生物大分子。

  不需高壓:相對(duì)于其他色譜技術(shù),操作簡(jiǎn)單,無(wú)需高壓。

  保持活性:由于色譜柱在分離過(guò)程中使用柔軟的凝膠材料,因此生物大分子的活性可以被更好地保持。

  凝膠色譜柱的填料是由多孔性凝膠顆粒構(gòu)成,這些顆粒可以具有不同的孔隙大小和排列方式,以實(shí)現(xiàn)對(duì)大分子的分離。常用的凝膠材料包括瓊脂糖、聚乙二醇、聚丙烯酰胺等。為了獲得高質(zhì)量的分離結(jié)果,選擇合適的填料材料和柱尺寸非常重要。此外,凝膠柱的操作和儲(chǔ)存應(yīng)遵循生產(chǎn)商提供的說(shuō)明書(shū)或建議,并且對(duì)于每次使用前都應(yīng)進(jìn)行柱的再平衡和校正。

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